تحضير الفلوريسين والأيوزين
تحضير الفلوريسين Preparation of Fluorescein
- ضع في أنبوب اختبار عادة بلورات من الريزوسينول والكمية نفسها تقريباً من بلاماء حمض الفثاليك.
- ثم أضف قطرة من حمض الكبريتيك وسخن ما سبق تسخيناً حذراً حتى ظهور لون أحمر غامق.
- وعند استعمال كمية زائدة من بلاماء حمض القتاليات فإنه يلاحظ تصعده وتوضعه على القسم البارد من الأنبوب.
- وعندما يبرد المزيج أضف إليه 6 قطرات من الماء لإذابة الفلوريسين الناتج.
- يمكن تسريع التفاعل بتسخين الأنبوب تسخيناً لطيفاً.
- خذ قطرة من محلول الفلوريسين الحمضي الناتج ذي اللون الأحمر البرتقالي وضعها في أنبوب الاختبار (a) واملأ الأنبوب بالماء.
- ثم أضف إلى المحلول الأصفر الناتج قطرتين من محلول NaOH تركيزه 2N فيظهر على الفور تألق (فلورة) أخضر.
- تزول الفلورة عند تحميض المحلول بمحلول HCl تركيزه 2N ، وتعود للظهور مرة أخرى عند جعل المحلول قلوياً.
- يستعمل الفلوريسين من حيث هو مشعر في التحليل الحجمي.
- يمكن ملاحظة الفلورة حتى في المحاليل الضعيفة جداً (مثل جزء من الفلوريسين مع 40 مليون جزء من الماء) . ولهذا فإن الفلوريسين يمكن أن يستعمل في الكشف الصحي الكيميائي (في تلوث مياه الشرب مثلاً).
- عند إضافة القلوي إلى المحلول المائي للفلوريسين فإن الرابطة اللاكتونية فيه تتحلمه بسهولة ، معطية حمضاً كربوكسيلياً يتحول أيضاً إلى الملح الصوديومي . وفي الوقت نفسه فإن إحدى جزيئي الريزرسينول تتحول إلى حلقة كوينونية كما في ملح الفينول فثاليين.
تحضير الأيوزين Preparation of Eosin
- خذ قطرة من محاول الفلوريسين الحمضي ذي اللون الأحمر البرتقالي وضعها في أنبوب اختبار (b) وأضف إليها 4 قطرات من محلول مشبع من ماء البروم.
- وسخن ما سبق حتى يذوب راسب رباعي بروم الفلوريسين الأصفر اللون والمعروف باسم الايوزين وعندما يبرد المزيج أضف إليه من 2 - 3 قطرات من محلول NaOH تركيزه 2N التعديل الحمض فيذوب الراسب ذوباناً سريعاً.
- املأ انبوب الاختبار بالماء وخص المزيج ، فيتكون محلول الأيوزين ذي اللون الوردي المصفر مع تألق (فاورة) أخضر مصفر . لاحظ كيف أن المحلول يصبغ جلد اليدين بلون وردي.
- خذ قطرة من محلول الأيوزين الناتج وضعها على ورقة ترشيح (3 × 3 ) سم بعد امتصاص قطرة الأيوزين بوساطة ورقة الترشيح . وضع في مركز البقعة الناتجة قطرة من الماء فتتكون حلقتان متمركزتان : داخلية ذات لون وردي ناتجة عن الأبوزين ، وخارجية صفراء ناتجة من الفلوريسين غير المتفاعل (أو المبروم) تفاعلاً غير تام .
- بلل جزءاً من البقعة الحمراء بقطرة من محلول HCl تركيزه 2N ولاحظ زوال اللون. أضف إلى المكان نفسه قطرة من NaOH فيعود اللون الوردي للظهور (قارن هذا مع خواص الفينول فتاليين والفلوريسين).
- ويمكن الحصول على أيوزين ذي ألوان مختلفة وذلك حسب درجة استمرار البرومة.
- يستعمل الايوزين استعمالاً واسعاً في الاختبارات المجهرية (كتلوين الأنسجة والميكروبات).